يُعد مضاد الماعز الموجه ضد tdTomato المرتبط بصبغة DyLight أداة متقدمة تُستخدم للكشف عن البروتين الفلوري الأحمر tdTomato في تطبيقات عديدة تشمل وسم الخلايا، المجهر الفلوري، وتحليل الخلايا بالتدفق (Flow Cytometry). هذا المضاد مفيد جدًا في الدراسات التي تعتمد على البروتينات المفلورة كمراسل جيني في الكائنات والنماذج الخلوية
ترتبط هذه الأجسام المضادة بصبغات DyLight الفلورية، ما يضمن إشارات ضوئية قوية ومستقرة، ويُحسن من جودة البيانات في تجارب الخلايا متعددة الألوان
tdTomato: الخصائص الطيفية والتعبير الجيني
tdTomato هو بروتين فلوري أحمر مزدوج الوحدة (Tandem Dimer) مشتق من DsRed، مُهندَس لزيادة السطوع وتقليل السُميّة الخلوية. يتميز بـ
إثارة عند 554 نانومتر
انبعاث عند 581 نانومتر
وهو متوافق مع أنظمة الليزر 561 نانومتر المستخدمة في أجهزة الفلوسيتومتر والمجاهر الليزرية
روابط مرجعية
قاعدة بيانات NIH للبروتينات الفلورية
نماذج الأسماك المعدّلة وراثياً في UCSD
مشاريع التتبع العصبي في Janelia
إنتاج المضاد وتأكيد التخصص
تم توليد مضادات الماعز ضد tdTomato من خلال تحفيز الجهاز المناعي للماعز بببتيدات tdTomato، ثم تمت تنقيتها بأساليب تعتمد على الارتباط النوعي
الخصائص
خصوصية عالية ضد tdTomato
عدم تفاعل كبير مع mCherry أو DsRed
مناسبة للعينات الثابتة وغير الثابتة
مصادر مرجعية:
Rockefeller University Proteomics Core
صبغات DyLight: الخصائص والفائدة
صبغات DyLight هي صبغات فلورية صناعية مقاومة للتلاشي، تعطي إشارات قوية ومستقرة
| صبغة DyLight | الإثارة (نانومتر) | الانبعاث (نانومتر) | الاستخدام الموصى به |
|---|---|---|---|
| DyLight 488 | 493 | 518 | التدفق الخلوي، قناة خضراء |
| DyLight 550 | 562 | 576 | تصوير tdTomato |
| DyLight 594 | 593 | 618 | التلوين المناعي الفلوري |
روابط طيفية
التطبيقات في التلوين المناعي والتصوير
تُستخدم مضادات الماعز ضد tdTomato المرتبطة بـ DyLight لتحسين إشارات tdTomato الأصلية، خاصة عند التعبير المنخفض أو التداخل الضوئي.
الإجراءات النموذجية
تثبيت الخلايا بـ 4% بارافورمالدهيد
غسلها بمحلول PBS
اختراق الغشاء باستخدام Triton X-100
الحجب باستخدام 5% مصل ماعز
حضن بمضاد tdTomato DyLight
التلوين بـ DAPI والتحليل
مصادر
Harvard Neurobiology Imaging Core
الاستخدام في التدفق الخلوي
عند استخدامه مع أجهزة التدفق الخلوي، يسمح المضاد بـ:
تضخيم الإشارة للعينات ذات التعبير المنخفض
فرز دقيق للسكان الخلوية
تجارب تحليل متعددة الألوان
أجهزة متوافقة
مصادر بروتوكولات:
التوافق مع Western Blot
يمكن استخدام هذه المضادات مباشرة في Western blot دون الحاجة إلى مضاد ثانوي، مما:
يقلل الضوضاء الخلفية
يوفر الوقت
يسهل الإجراء التجريبي
مصادر:
التوافق مع العينات والأنسجة
تم اختبار المضاد على:
أنسجة الفئران (الدماغ، القلب، الرئة)
نماذج أسماك الزرد وذبابة الفاكهة
خلايا iPSC المشتقة
نماذج ثلاثية الأبعاد (Organoids)
مصادر
التخزين والتعامل والسلامة
الحفظ بين 2–8 مئوية، بعيدًا عن الضوء
تجنب التجميد المتكرر
اتبع تعليمات الورقة التقنية لكل منتج
مرجع:
المشاكل الشائعة والحلول
| المشكلة | السبب المحتمل | المرجع |
|---|---|---|
| إشارة ضعيفة | تعبير منخفض للبروتين | PubMed 26150219 |
| ضوضاء خلفية | انسداد غير كافٍ | NCBI Protocols |
| تداخل طيفي | تصميم غير مناسب للتجربة | NIH Flow Cytometry |
كلمات مفتاحية لتحسين محركات البحث
تم استخدام الكلمات المفتاحية التالية لزيادة ظهور المقال في محركات البحث:
مضاد tdTomato المرتبط بـ DyLight
الكشف عن tdTomato باستخدام المجهر
tdTomato في تحليل التدفق الخلوي
DyLight 594 لكشف tdTomato
tdTomato reporter detection
tdTomato antibody direct conjugate
tdTomato western blot detection
tdTomato fluorescence microscopy
goat anti-tdTomato DyLight antibody
red fluorescent protein detection antibody
Leave a Reply